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C18液相柱及保护柱:高效液相色谱的关键组件

  • 发表时间2024-09-13
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  在现代化学分析领域,高效液相色谱(HPLC)技术凭借其高分离效率、高灵敏度和准确性,成为了重要的分析手段。而在HPLC系统中,C18液相柱及保护柱扮演着至关重要的角色。
  C18液相柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填料,具有较高的碳含量和出色的疏水性。这使得它对各种类型的生物大分子有着强大的适应能力,适用范围广泛,是高效液相色谱仪分析中极为重要的色谱柱类型。
  在使用C18液相柱时,有许多需要注意的要点。新的C18色谱柱在使用前,必须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗,这样能使固定相充分润湿、碳链舒展,让色谱柱的性能达到最佳状态。而在液相色谱仪检测分析样品完毕后,也需要冲洗色谱柱。特别是当流动相中含有酸或盐时,必须将色谱柱中的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积。
  如果色谱柱长期闲置,要将其冲洗,并保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液中,比如90%甲醇水。同时,由于C18柱的固定相疏水性较强,使用过程中应尽量避免高水相条件,建议水相比例不超过90%,否则易引起固定相疏水塌陷,导致柱效迅速下降,甚至造成不可逆的负面影响。
  当色谱柱出现压力升高、柱性能下降的情况,通常是因为色谱柱被污染,对其进行再生处理可恢复部分柱效。而色谱柱压力骤升,可能是盐析出或筛板堵塞引起。若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可;若不是盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱,若反冲半小时仍无效果则需寻找其他原因。
  为了延长C18液相柱的使用寿命,保证分析结果的准确性和重现性,保护柱的使用是不可少的。在HPLC系统中,不能保证所注射样品能够洗脱,尤其是中药及血液样品,每次进样总会有一部分残留在柱头,久而久之就会使柱头失效。而保护柱能够有效地解决这一问题。
  这种新型的保护柱组件结合了不锈钢的强度和PEEK预填柱芯的方便和高效。无需使用工具,将一小段与柱填料相同的保护柱置入进样阀和色谱柱之间,就能延长色谱柱的寿命,保证重现性结果。

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